显微镜下的食品病毒

进入21世纪，随着物质产品的不断丰富、生活水平的日益提高，人们对饮食的需求也越来越高，越来越精细。然而，冷冻食品被检出含有致病性金黄色葡萄球菌、奶制品中致癌物黄曲霉毒素超标、糕点菌落超标上千倍、餐饮单位餐具被检出大肠菌群……五花八门、接二连三的食品质量问题时不时给兴头上的人们泼上一盆盆凉水，不仅浇灭了他们对美食的向往，更冷却了他们信任食品质量的热情。金黄色葡萄球菌可引起肺炎、败血症；黄曲霉毒素是一种剧毒物质，对人的肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡……虽不至于谈“食”色变，但已然人心惶惶。--显微镜下的食品病毒

不难看出，目前层出不穷的食品质量问题都涉及到同一种物质，那就是微生物。微生物是地表上数量最多的生物，遍布人类生活的每个角落。据说，它们在距今约30多亿年前就出现了，可以说见证了人类的发展，人类应该对它们相当熟悉。但直到17世纪，荷兰商人列文虎克发明了世界上第一台光学显微镜后，人类才首次看见微生物的模样。由于绝大多数微生物都小得看不见或看不清，所以始终处于被忽视、被遗忘的境地，尤其是普通公众对它们知之甚少。这群生活在微观世界里的生命到底是怎样的生物，又是如何影响我们的日常生活？人类应该和它们分庭抗礼还是和平相处？……《掉在地上的饼干能吃吗——有关微生物的必要常识》（以下简称《饼干》）解答了我们的种种疑问。

微生物和人类朝夕相处，其中的细菌、真菌、病毒可以说是公众最为了解。在《饼干》一书中，你可以看到经常上报纸头条的葡萄球菌、链球菌、幽门螺杆菌等大名鼎鼎的微生物的身影。葡萄球菌属的著名成员金黄色葡萄球菌在1980年曾引发“中毒性休克综合征”的疾病，800多名女性由于使用了被污染的卫生棉条而受到感染，其中有40多名不幸丧生；家喻户晓的儿童电视节目《芝麻街》中木偶的创造者亨森（Jim Henson）就是因为感染上一种会释放毒素且能高速增殖的链球菌导致肺炎而病逝的；而困扰许多患者的胃溃疡、十二指肠溃疡，甚至胃癌的，正是名声大噪的幽门螺杆菌……

看到这里，也许你不禁要问：微生物难道都是和人类过不去的家伙吗？答案当然是否定的。此书不仅列举了“坏微生物”的罪状，还罗列了“好微生物”的功绩。例如，霉菌界的超级巨星——青霉菌，它被发现能提取青霉素，大大增强了人类抵抗细菌性感染的能力，开创了人类使用抗生素治疗疾病的新纪元；大肠杆菌在绝大多数情况下安分守己，还能帮助合成维生素K2；乳酸杆菌为人类的食品工业做出了许多贡献，是一群生活在机体内，有益于宿主健康的微生物，能维护人体健康和调节免疫功能……随着科技日新月异的发展，越来越多的微生物被用来造福人类，如嗜酸微生物可用来保存食品，纳米生物学还会借助一种病毒，警告人体内部出现毒素，为癌症发病预测开创先河……

在公正地评价林林种种的微生物的同时，作者还详细介绍了居家、工作场所、公共场所等各种环境中的微生物世界，病菌的传染途径和方式，以及如何提高自身免疫力，预防感染的秘诀，并提供了诸如“砧板保养小贴士”、“旅行小贴士”等健康提示。对于公众在微生物方面普遍存在的误区，作者也进行了澄清。例如，许多消费者认为用了抗菌肥皂就可以杀菌了，殊不知抗菌成分必须在洗涤表面停留足够的时间后才能起作用，而相当一部分人洗手都草草了事，得到心理安慰的同时却没有享受到抗菌成分的益处。

《饼干》是“让你大吃一惊的科学”书系中的一本，作者是美国知名微生物学家。作为一本介绍微生物的科学读物，它秉承了该书系的特色，通篇没有艰涩的专业术语，内容深入浅出，文字通俗易懂，清晰地勾勒出显微镜下的无声兵团，涉及的微生物知识都和日常生活密切相关，全书最后还对大众最关心的25个问题进行了解答，可以说兼具可读性与实用性。看了这本书，你不仅能了解很多微生物学知识，还能更理性地看待开篇提及的那些食品安全问题，因为人类完全可以通过加强对食品卫生的监管，树立科学的生活观念，养成健康的生活方式与习惯，从而与微生物和平共处。

来源：网络

徕卡倒置荧光显微镜操作教程

徕卡倒置荧光显微镜操作教程

一、明场观察
1．  把要观察的载玻片固定在载物台上。
2．  打开显微镜右侧的电源开关，挡光片往下打。
3．  调节聚光镜座至BF位置，荧光转盘调至4位置，物镜棱镜调至BF位置。
4．  先用低倍镜进行观察，然后转至高倍镜。
5．  观察完毕，取下载玻片，把物镜调至空档处，盖好物镜和目镜防尘盖。关上电源，盖上显微镜防尘罩。
6．  做好使用记录。
二、荧光观察
1．  打开荧光观察专用的汞灯光源，预热2～3分钟。
2．  先在普通光下观察，对焦，然后将挡光板往上打，将普通光路挡住，转至汞灯光路上。
3．  将荧光滑片拉出，调节荧光转盘至所需荧光相应位置。（1－紫外激发 340～380nm；2－蓝光激发 450～490nm；3－绿光激发 510～560nm；4－明场）
4．  观察完毕，关闭汞灯光源。（为延长汞灯寿命，开启30分钟后再关闭）
5．  观察完毕，取下载玻片，把物镜调至空档处，盖好物镜和目镜防尘盖。关上电源，盖上显微镜防尘罩。
6．  做好使用记录。

奥林巴斯荧光显微镜 Olympus SZX16 操作教程

奥林巴斯 SZX2 系列建立在SZX系列的基础上，承继并超越了SZH系列，在各领域都树立了新的标准。其关键在于应用了多种新的设计：采用卓越的伽利略光学系统的光学设计提供完美的图象效果，并且能够保证与各种图像设备的兼容。

物镜：                     1×
变倍：                     0.7~11.5


荧光滤色块转盘：   UV       蓝
   GFPHQ   绿
                   RFP2     红
                 
SZX16 操作步骤：
   明场观察：
1. 将样品置于载物台上
2. 推入光路选择拉杆，荧光滤块转盘拨到空位
3. 选择合适的光源
⑴ 冷光源观察
 使用不透明的底板（黑或白），打开环形光电源开关（“︱”为开，“○”为关），调节光强度，找到预观察视野，调节变倍比，观察样品
⑵ 底光源观察
    使用透明玻璃底板，打开底座电源开关（“︱”为开，“○”为关），将LBD滤片推入光路，调节反光镜方向、对比度和光强度，找到预观察视野，调节变倍比，观察样品
4. 拍照时将光路选择拉杆拉出
荧光观察：
1. 将样品置于载物台上
2. 一般选择黑色不透明底板
3. 打开汞灯电源开关
4. 荧光光路挡板推出
5. 根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置
6. 找到预观察视野，调节变倍比
7. 观察样品
8. 拍照时将光路选择拉杆拉出

SZX16 关机：
1. 关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次开启）
2. 将明场光强调到最小，关闭明场电源开关
3. 取出样品，将变倍比调到最小
4. 确认数据已经保存，关闭软件
5. 使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据）
6. 关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况

Olympus SZX16   操作注意事项
1. 工作日使用仪器,开关机器、汞灯由工作人员负责，操作者不得自行开关！
2. 若使用油镜，使用完毕后，镜头的檫拭也由工作人员负责。
中午、晚上及双休日为经过培训后具有完全独立操作资格使用者的使用时间，需本平台特批，课题组长签字同意并担保仪器的使用安全。

奥林巴斯 SZX16 国内代理销售商--明美光电 MSHOT

奥林巴斯荧光显微镜 Olympus IX71 操作教程

奥林巴斯 IX71（配置参数） 倒置显微镜与崭新的UIS2 光学系统相结合，开创了活细胞成像的新世界。

奥林巴斯荧光显微镜 Olympus  IX71 操作教程：

物镜：              物镜倍数     相差环
4 ×0.13     PHL                    
                    10×0.30     PH1                                    
                    20×0.45     PH1                                    
                    40×0.60     PH2                                    
                    60×1.35  oil （无相差）                                      
                                                         

荧光滤色块转盘：    1.  WU      蓝
                    2.  WIB     绿（长通）
3.  WIBA    绿（带通）
4.  WIGA    红
5.  CFP
6.  YFP


Olympus  IX71 操作步骤：
  相差观察：
1. 打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关）
2. 将样品置于载物台上
3. 将光路选择旋钮调至观察位置
4. 从低倍镜开始观察，调节到与镜头相匹配的相差环，荧光滤块转盘拨到 “1”的位置
5. 调节透射光光强，调节焦距，找到预观察视野
6. 依次换到高倍镜，（注意调节相差环）观察样品
7. 拍照时将光路选择旋钮调至相机位置

  荧光观察：
1. 打开明场电源开关
2. 打开汞灯开关
3. 将样品置于载物台上
4. 将荧光光路shutter打开（“○”为开，“●”为关），需保护样品时关闭shutter
5. 将光路选择旋钮调至观察位置
6. 根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置
7. 通过两组减光滤片调节激发光强度
8. 从低倍镜开始观察，调焦，找到预观察视野，
9. 依次换到高倍镜头，观察样品
10. 拍照时将光路选择旋钮调至相机位置

普通明场观察：
1. 打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关）
2. 将样品置于载物台上
3. 将光路选择旋钮调至观察位置
4. 从低倍镜开始观察，相差环拨到明场（BF）位置，荧光滤色块转盘拨到“1”的位置
5. 调节透射光光强，调焦，找到预观察视野
6. 依次换到高倍镜，观察样品
7. 拍照时将光路选择旋钮调至相机位置


Olympus  IX71 关机：  
1. 关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次开启）
2. 将透射光强调到最小，透射光选择按钮按出
3. 关闭明场电源开关
4. 将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头
5. 确认数据已经保存，关闭软件
6. 使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据）
7. 关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况


Olympus  IX71   操作注意事项
1. 工作日使用仪器,开关机器、汞灯由工作人员负责，操作者不得自行开关！
2. 若使用油镜，使用完毕后，镜头的檫拭也由工作人员负责。
中午、晚上及双休日为经过培训后具有完全独立操作资格使用者的使用时间，需本平台特批，课题组长签字同意并担保仪器的使用安全。

奥林巴斯荧光显微镜 BX51 操作教程

BX51是奥林巴斯荧光显微镜系列中的一款明星产品，国内的高校和研究所使用得最多。奥林巴斯 OLYMPUS BX51荧光显微镜合多种观察方法，从明场到荧光。

BX51 操作步骤：（注意：样品须在低倍镜下放置和取下）

BX51 DIC观察：

1.       打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关）

2.       将样品置于载物台上，用样品夹夹好

3.       将起偏器、检偏器、DIC棱镜推入光路，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜应与相应的物镜倍数相匹配

4.       先选用低倍物镜（“10×”）

5.       调节透射光的强度，调节焦距，找到视野

6.       换到高倍镜头，观察样品

7.       DIC观察时，光路选择拉杆拉到中间位置，既可观察，也可拍照

BX51 荧光观察：

1.       打开明场电源开关

2.       打开汞灯电源开关

3.       将样品置于载物台上，用样品夹夹好

4.       检偏器、DIC棱镜在光路外

5.       将荧光光路shutter打开（“○”为开，“●”为关），需保护样品时关闭shutter

6.       光路选择拉杆推至最里边

7.       根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置

8.       通过两组减光滤片调节激发光强度

9.       从低倍镜开始观察，调焦，找到预观察视野，

10.    依次换到高倍镜头，观察样品

11.    拍照时光路选择拉杆完全拉出

BX51 普通明场观察：

1.       打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关）

2.       将样品置于载物台上，用样品夹夹好

3.       起偏器、检偏器、DIC棱镜在光路外，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜拨到明场（BF）位置

4.       先选用低倍物镜（“4×”）

5.       调节透射光的强度，调节焦距，找到视野

6.       依次换到高倍镜头，观察样品

7.       光路选择拉杆拉到中间位置既可观察，也可拍照

BX51 关机：

1.  关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次开启）

2.  将透射光调到最小，关闭明场电源开关

3.  将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头

4.  确认数据已经保存，关闭软件

5.  使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据）

6.  关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况

 BX51  操作注意事项

1.              工作日使用仪器,开关机器、汞灯由工作人员负责，操作者不得自行开关！

2.              若使用油镜，使用完毕后，镜头的檫拭也由工作人员负责。

中午、晚上及双休日为经过培训后具有完全独立操作资格使用者的使用时间，需本平台特批，课题组长签字同意并担保仪器的使用安全。

关于荧光显微镜 BX51的纤细参数请移步到 http://www.mshot.com/bx51yingguang.htm

荧光显微镜基本操作教程和注意事项

荧光显微镜基本操作教程和注意事项

此教程适用于国产（例如：mshot的各系列荧光产品）和进口的荧光显微镜（例如：奥林巴斯各系列荧光产品）。同样不同功能的，例如生物荧光显微镜，体视荧光显微镜，数码荧光显微镜等都是使用的。

1． 关闭房间内的电灯，开启荧光显微镜汞灯；
2． 根据样品标记的荧光素选择相应的滤光片；
3． 放好样品，找到合适的视野；
4． 如需拍照，请确认照相机内已装好彩色
胶卷（最好使用27定胶卷）；
5． 开启荧光显微镜自拍装置，选择手动档，通常拍摄
速度在0.5---10秒内；
6． 使用结束，关闭所有电源并做好使用记录。
7． 如需详细说明，请借阅说明书。

注：
A．为延长汞灯的使用寿命，汞灯开启不到15分
钟的请在15分钟后关闭荧光显微镜的汞灯。
B．在荧光状态下观察标本，标本内的荧光染色会较快的衰减，所以要避免长时间的在荧光下观察。

荧光显微镜的功能配置及应用要点

本文是一片来自网络的关于荧光显微镜日常操作文章，作者：崔泽实　郭德伦

来源：https://groups.google.com/forum/?hl=zh-CN&fromgroups=#!topic/imicroscope/slF_jZ_-IjE/discussion

在荧光显微镜观测时 , 镜像模糊、荧光暗弱、亮度不均、拍摄记录条件难以控制等是困扰实验者的常见问题。除荧光标本的制备环节外 , 掌握仪器的基本原理 , 合理配置、正确使用、必要的实时调试也是非常重要的 , 本文拟对后者略谈工作体会。 荧光显微镜是利用特定波长的光照射被检物体产生荧光进行镜检的显微光学观测技术 , 已有 100 多年历史。近年来 , 由于免疫荧光在医学研究、诊断领域里的广泛应用 , FISH、绿色荧光蛋白 ( GFP) 技术分别在基因组学、蛋白质组学研究方面的推广 , 显微照相、数字 CCD 成像技术的辅助驱动 , 赋予这一传统技术更新的应用价值和生命力。

1 基本原理
荧光: 是一种非温度辐射冷光 , 据发生性质可分为光化荧光 (由特定光源光谱激发而产生的荧光) 、放射荧光 (放射性物质激发) 、生物荧光 (生物体发出) 、化学荧光 (如磷氧化时) 等。荧光现象: 某物质在受到某种特定波长的高能量光 (短波长) 照射后获取能量 , 几乎即时 (约在 10～15 s 后) 其分子内的电子跃迁到较高能级轨道使分子进入激发态 , 激发态的分子不通过内部转换方式消耗能量回到基态 , 而是释放出相应较低能量的光量子→人眼可见的荧光 (较长波长) 。荧光现象有两种:一次荧光现象 , 又称"固有荧光"或"自发荧光", 是指经照射后 , 就能发出荧光的物质 , 此类物质的化学特征是发光分子具有共轭双键 , π电子活动性大。

二次荧光现象 , 又称"继发荧光", 物质经照射后不能或只能部分发生微弱的荧光 , 这样就需先用荧光色素 (或称荧光染料、荧光探针) 标记处理 , 将荧光色素标记结合插入到不发光的活性分子中去 , 再经照射才能发生荧光。荧光色素应具备的基本条件是能与不发光分子的某个区域有特异性的牢固结合 , 同时不会影响被结合分子的结构和特性 , 光量子效率应≥013。

荧光 的 产 生 包 含 了 激 发 ( Excitation) 和 发 射(Emission)两个过程 , 激发光谱短于发射光谱 , 故光色不同。而不同的荧光物质或荧光色素有其最敏感而有效的激发波长 , 因此选择合适的激发/ 发射光谱以获得最佳的荧光镜像质量是实验中要首先考虑的。荧光显微镜是利用"光化荧光"成像 , 如果所选激发波长在肉眼所看不见的近紫外光区 ( 320～400 nm) , 荧光的发射光谱也较普通光镜光源的平均波长短 , 光学分辨率提高。

2 荧光显微镜装置

近代荧光显微镜多是在复式显微镜的架构上安装荧光装置集合而成 , 荧光装置包括荧光光源、激发光光路、激发/ 发射滤光片组件等器件。荧光光源: 提供特定激发光波长范围及其光效能量的光源 , 以保证检测样品得到足够的激发而发出强的荧光。一般荧光显微镜多采用汞灯做光源 , 能够在常用激发光波长范围内提供不连续的光谱 , 在几处常用的光谱线 (365、405、449、550、600 nm) 表现有较强的光效能;如果荧光仅限于可见光范围内激发(如免疫荧光常用的 FITC ,436～490nm) ,也可考虑采用卤素灯光源;如追求紫外光激发效能的连续稳定性也可采取带状光谱特征的氙灯光源(细胞内 Ca+ +测定) 。在光源灯箱外侧装有 2～3 个灯丝对中心调整镙杆。荧光共焦显微镜则是用激光器经光纤导光做光源。荧光光光路: 或称荧光照明器 , 主要部件是一组聚光透镜 , 装有光路对焦调节; 在光路中还设有孔径光阑和视场光阑调节器件、ND 滤光片插槽 (板) 、激发光分光或处理镜件等。

激发/ 发射滤光片组件: 是一组具有一定通带宽度、带通 , 把激发/ 发射光谱选择性地限定在某一特定波宽内或带通的光学滤镜器件。目前多数厂家是把激发和发射光滤光片组合在一个立方体状结构里 , 安装在多位盘状转换器上调置于激发/ 发射光路中 (物镜与目镜间的镜筒) , 在两光路的垂直位成 45°角置一片称之为双色分光镜 (Dichroic Beamsplitter) 的滤光片选择性的透过或截止激发光和发射光。依据荧光样品的激发和发射光谱不同生产有不同宽窄带宽、长短带通组合的激发/ 发射滤光片组件 , 例如 EX470/ 40 或EX480/ 20 , 则 表 示 激 发 光 谱 是 在 中 心 波 长470 nm ±20 nm之间或 480 nm ±10 nm 之间 , EM522/ 40或 EM500 , 表示发射光谱在 522 nm ±20 nm 之间或≥500 nm (长发射通带) 。

荧光显微镜装置有透射式和落射式两种类型。近代荧光显微镜多采用落射式 , 即激发光是从物镜照射到样品 , 样品受激发后发出的发射光再经物镜聚光投射到观测光路 , 操作简单、视场均匀、高倍明亮、低倍暗。落射式荧光装置光路 , 见图 1。激发光从进入经物镜照射到标本上产生的荧光再反射给物镜观察 , 适于透明及非透明标本。

3 功能配置
要根据对显微荧光观测技术的实际需求 , 考虑以下因素 , 配置相应的功能附件。
1) 荧光照明器
个别厂家的荧光光源收光镜在质量上有消色差和复消色差两种 , 前者可满足常规工作 , 特殊研究可选后者。如果观测样品荧光亮度强 , 可选配适当透过率的 ND 滤光片。

2) 激发/ 发射滤光片组件
理论上应当针对拟使用的荧光色素或样品的荧光特性选择对应波谱的激发/ 发射荧光组件 , 做到合理搭配 , 但由于组件的种类繁多且价格较贵 , 一般常配宽带/ 长通滤光片组件。如果实验条件明确 , 则可以选择窄带/ 短通组件 , 如 GFP、FISH 观察。当然还有多波长组合 , 同时观测多个荧光光谱。除荧光显微镜生产厂家外 , 还可以向专门生产激发/ 发射滤光片的厂家 (如 , Chroma , Omega 等) 订购。常用荧光激发/ 发射组件及其适用的荧光色素见表 1。

3) 物镜
临床检验中有使用平场消色差物镜的情形 , 但若经常做 UV 激发会造成镜头老化 , 且会产生自发荧光。为达到较好的荧光观察效果 , 应考虑配置:
(1) 用无荧光氟石或萤石玻璃制成不会受激发产生自发荧光的落射荧光专用物镜。
(2) 如果用一个物镜兼顾荧光与透射相差成像 ,物镜级别一定要高 , 但因此种物镜的后焦面装有相位板会影响荧光成像效果 , 观测荧光较弱的样品最好要另配常用倍率的荧光专用物镜。
(3) 数值孔径尽量大 , 以获得较好的镜像亮度(亮度 = NA 物镜/ 放大倍率) 和分辨率。
(4) 要充分考虑待测样品的工作距离 , 对 40 ×以上物镜 , 如果载片较厚或是用倒置荧光观察培养器皿 , 应选择长工作距离的物镜且最好装有覆盖差校正环。

(5) 带数值孔径调节环的 100 ×油浸物镜。
(6) 用 FURA2 标记做细胞内 Ca+ + 测定或其他UV 激发 , 最好选用 UV 专用物镜。
4) 显微镜如用落射荧光仅是做常规荧光镜检 , 对显微镜就不一定追求高功率的透射光光源 , 6 V 30 W 卤素灯也可。但如果经常需要配合透射光观察 (如相差、DIC
等) 和兼做明场显微照相的情况下 , 则最好选择12V100W卤素灯光源机型; 相应周到考虑聚光镜的配置(如相差聚光镜) , 有条件最好选择兼顾明场、暗场、相差、DIC等功能的通用聚光镜。还要充分照应到荧光照相、数字 CCD 相机的接口适配能力。

5) 显微照相装置
要求应当是自动机型但有手动控制功能 , 另需具备 011 %或 1 %点测光和设有专用于荧光照相的拍摄模式 , 因荧光镜像的背景或物像较暗 , 最好配置有照明调焦调焦标线的取景放大镜 , 以利于调焦。

6) 数字 CCD 相机
数字 CCD 成像技术发展甚快 , 与显微镜配套使用的数字 CCD 相机种类较多。追求分辨率固然重要 ,但若获取好的显微荧光成像质量 , 还要考虑 CCD 的成像方式、灵敏度、成像速度、芯片对所用荧光素发射波长的量子利用效率等技术参数。满足一般荧光成像应采用科学级芯片 , 最好是冷 CCD , 以消除荧光成像遇到的暗流 (Dark Current) 干扰。

4 应用要点
1) 预检查和调节
(1) 在每次进行荧光观测前 , 必须例行检查荧光装置的灯丝对中、光路对焦、孔径光阑、视场光阑设置等状况。
(2) 所需要的荧光激发/ 发射滤光片组件是否已装在转换器中 , 物镜配置是否得当 , 除去物镜前透镜的油渍和灰尘。
(3) 如同时进行透射光相差观察 , 要检查聚光镜对中心及相差环与物镜相反的共轭情况。
(4) 检查样品载体 (载玻片、盖玻片和其他器皿) 有否挂有液体、灰尘 , 厚度是否在物镜标定的工作距离范围内。切片样品不能太厚 , 约 ≤10μm为宜。
(5) 因照明光源含有紫外线 , 在载物台前上方放一块棕色遮光板 , 以防紫外线损伤视网膜。
(6) 电压不稳会降低高压汞灯的使用寿命 , 光源电源最好加配稳压器。

(7) 为延长汞灯寿命 , 在开启后 15 min 方可关闭; 汞灯荧光电源一旦关闭 , 再次启动至少需等待10min , 以使水银蒸汽冷却复至原态 , 否则会影响灯的寿命。

2) 荧光镜像观察
(1) 在开启荧光灯源后约 5～10 min 激发光强度趋于稳定 , 装载样品进行观察; 为防止在调焦和寻找物像过程中过度激发光照会造成样品荧光淬灭 , 最好先通过缩小荧光照明器的孔径光阑或加 ND 滤光片将激发光调节到适度强度 , 有规律地移动样品台 , 待确定镜像后 , 在调节到最佳荧光状态用于拍摄记录。

(2) 镜像质量不佳的调整。排除样品制备因素外 , 可进行的必要调节措施是: ①排除成像光路中的遮光或限光器件 , 如 DIC 附件、ND 滤光片等。②重新调节荧光照明器的收光器对焦和孔径光阑大小。③细心调节物镜覆盖差校正环。④复查荧光激发/ 发射组件是否与所标记的荧光色素对应。

(3) 在不影响分辨率的前提下 , 于照相取景框和CCD 靶面范围之外 , 可尽量回缩荧光光路视场光阑和物镜 (100X 物镜) 的数值孔径光阑调节环 , 以避免杂散光的影响、提高景深 , 并可减小激发面积防止附加样品淬灭。
(4) 暂时不观察时 , 应阻断激发光路。
(5) 油镜观察时 , 须用"无荧光油", 尤其是在U、V 激发时 , 因常规镜检用的香柏油带有青色荧光。

3) 荧光照相和数字 CCD 相机图像采集
(1) 荧光照相

①尽管肉眼观察荧光镜像亮度与普通明场相差无几 , 而实际上曝光时间要增加数倍甚至几十倍 , 应使用 快 速 感 光 胶 片 , 如 ISO200 ( 24DIN ) 、ISO400(27DIN) 。②根据荧光物像在测光区的分布比例和镜像的明暗程度设置曝光补偿调节 , 原则上适当增大补偿 , 以获得背景黑暗荧光图像明亮、鲜艳的照片效果。③如果没有照明标线取景器 , 可先选择较明亮的荧光区域进行对焦调整。④对点状荧光物像或扑捉某点为主的拍摄 , 可选择适当的点测光模式。⑤对在同一幅需要同样条件拍摄的分散点状荧光物像 , 可试用点测光配合自动锁定方式拍摄。⑥曝光过程应避免任何振动 , 有条件可配置防震台。

(2) 数字 CCD 相机图像采集
①光学接口的中间倍率要与 CCD 的芯片尺寸合理匹配。②采用合适的荧光拍摄模式 , 摸索减背景(Background Subtraction) 处理条件 , 根据镜像情况设置 Binning、Gain、Gamma 等参数。 ③因 CCD 芯片灵敏度较高 , 如果荧光镜像过于明亮 , 为获取对比度较好的采集图像 , 可适当缩小荧光照明器孔径光阑或加ND 滤光片 , 特别是在荧光辉光较强影响拍摄样品细节的情况时。实际工作中 ,为获得较好的荧光图像拍摄质量需要对上述调节机制的综合运用 ,反复摸索、优化条件。